T-SPOT.TB，这么多年都拼错了吗！ | 朝花夕拾 · 协和八

【小编按】歌德、肖邦、林黛玉、鲁迅，这些人有什么相似之处？答案是——他们都死于肺结核……现在结核虽然不再骇人听闻，但其检查手段和治疗方案是我们应当掌握的！这篇 T-SPOT.TB 第一次推送的时候，文中有几处不够严谨的地方，后来刘晓清教授还专门致信，做了详实的解释和补充。之后，小编又将这些地方重新修改。知识需要反复记忆，好文值得再次回顾。那么就让我们一起回顾一下吧！

* 回复关键词「 T-SPOT.TB 」或「 结核 」或「 TB 」可查看所有 T-SPOT.TB 相关内容。

T-SPOT.TB

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本期主播：闲闲闲兔

T-SPOT.TB：结核感染特异性 T 细胞检测，完整名字为 T-SPOT.TB assay，属于 IGRAs（γ 干扰素释放试验）的一种。 

* T-SPOT.TB 是完整正确称呼，是 2002-2003 年牛津大学 Lalvani 教授带领的课题组发明这个检测时定下来的名称，那时正值我院感染科刘晓清教授在那里为访问学者。「.TB」在任何时候都不能省略，未来可能还会出现 T-SPOT.CMV、T-SPOT.EBV……

• T：T 细胞

• SPOT：ELISPOT（酶联免疫斑点技术）是一种从单细胞水平检测分泌抗体或细胞因子细胞的免疫学新技术。原理是用抗体捕获培养细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。

• TB：结核分枝杆菌

T-SPOT.TB 应用 ELISPOT（酶联免疫斑点技术）检测经结核特异性抗原 ESAT-6（抗原 A）、CFP-10（抗原 B）肽段库刺激后外周血单个核细胞 IFN-γ 的分泌，并经一系列反应后以斑点显示。

A、B 两种抗原的编码基因位于结核分枝杆菌 RD1 区，该区域在卡介苗和绝大多数非结核分枝杆菌中缺失，因此可以避免交叉反应，提高特异性。因此 T-SPOT.TB 检测的是针对结核抗原的特异性细胞免疫反应。

当患者体内出现针对结核抗原的特异性淋巴细胞时，提示该患者存在结核感染。结核感染包括潜伏结核感染和活动性结核。

（潜伏结核感染指体内存在结核分枝杆菌，但无临床症状且影像学无异常表现。此后少部分人可能发展为活动性结核。）

本院 T-SPOT.TB 检测过程：收集 1*10^6 外周血单个核细胞（PBMC），平均分为 4 份，每份细胞数为 2.5*10^5 PBMC，分别加入空白对照、抗原 A、抗原 B、阳性对照孔中。然后使用 ELISPOT  法，并分别记录每个孔中斑点形成细胞数目（SFCs）。

* 表述 T-SPOT.TB 结果时必须带分母（也就是俗称的「单位」，就如我们的血常规中的 WBC， Hb 等后面的分母「单位」，大家看报告时是不可以省略的啊！）

存在下面几种情况：

①  阳性结果（Reactive）

• 当空白对照≤ 5 SFCs /2.5*10^5 PBMC 时，只要（A-空白）或者（B-空白）≥ 6 SFCs /2.5*10^5 PBMC 考虑为阳性，存在结核感染。

• 当空白对照≥ 6 SFCs /2.5*10^5 PBMC 时，要求 A 或 B 孔细胞数大于空白两倍才考虑阳性。

②  阴性结果（Non-reactive）

• 当（A-空白）且（B-空白）< 6 SFCs /2.5*10^5 PBMC 且阳性对照≥ 20 SFCs /2.5*10^5 PBMC 时，考虑为阴性结果。

③  不确定结果（Indeterminate）

• 当（A-空白）且（B-空白）均< 6 SFCs /2.5*10^5 PBMC 且阳性对照< 20 SFCs/2.5*10^5 PBMC 时，考虑为不确定结果，无法判断是否存在结核感染，建议重新送检。

④  技术误差

• 当空白对照 ≥ 10 SFCs /2.5*10^5 PBMC 时，考虑技术误差，无法判断是否存在结核感染，建议重新送检。

由于每孔细胞数为 2.5*10^5 PBMC，而我院化验单回报结果单位会换算成10^6 PBMC，数值即为 A、B 实验孔出现斑点形成细胞数目（SFCs）减去空白对照后乘以 4，因此化验单上界值为 24 SFCs /10^6 PBMC。因此，在回报的化验结果中，只要 A 或者 B 值≥ 24 SFCs/10^6 PBMC 则考虑存在结核感染。

需要注意 ，T-SPOT.TB 结果只能作为是否存在结核感染的参考，无法鉴别诊断潜伏感染和活动性结核病。除病原学确诊外，结核病的临床诊断需要结合临床表现、实验室检查、影像学结果、诊断性抗结核疗效等进行综合判断。

综上所述：

*表中单位为：SFCs/ 2.5*10^5 PBMC）

一句话：只要 A 或者 B 值 ≥ 24 SFCs/10^6 PBMC 考虑存在结核感染，但阴性不能除外结核感染。

① 阳性结果

1. 提示患者体内存在结核分枝杆菌特异性效应 T 细胞，患者存在结核感染（在病原学确诊的活动性结核病患者中，T-SPOT.TB 的敏感性 90%，特异性 95%；在卡介苗广泛接种人群或发展中国家敏感性 88%、特异性 59%）。在我国 T-SPOT.TB 用于协助诊断活动性结核病时，假阳性率较高。

2. T-SPOT.TB 阳性结果不能作为单独或是决定性的诊断结核病的依据。

3. 虽然 ESAT-6 和 CFP-10 在所有的卡介苗菌株以及绝大多数环境分枝杆菌中缺失，但 T-SPOT.TB 的阳性结果有可能是其他分支杆菌的感染引起的，如堪萨斯、苏氏、戈登或海分枝杆菌。（注：这些分枝杆菌可致 HIV 患者机会感染）

4. HIV 感染者并发结核的筛查：T-SPOT.TB 受 CD4 细胞计数水平的影响比  QFT-GIT（用于检测 IFN-v 值）小，可以减少 HIV 感染后细胞免疫功能受损而导致的假阴性结果。

5. 结核菌素试验 TST 也许会造成 T-SPOT.TB 假阳性结果，因此需同时检测T-SPOT.TB 和 TST 时，T-SPOT.TB 的血样最好在 TST 实验前或者实验后 3 天内采取。

② 阴性结果

提示患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应 T 细胞。如出现以下情况，阴性结果不能排除结核杆菌感染的可能：

• 因感染阶段不同引起的假阴性结果，如标本是在细胞免疫发生前获取的；

• 少数免疫系统功能不全的情况，如 HIV 感染者、肿瘤患者、儿童等；

• 以及其它免疫学、实验非正常操作的差异。

不能，但有提示意义！

研究证实，活动性结核病患者与潜伏性结核感染者进行 T-SPOT.TB 检测，前者的斑点数显著高于后者（P<0.001），但两者之间重叠区域很大，潜伏性结核感染的斑点数也有可能高于活动性结核病。因此 T-SPOT.TB 难以区分活动性结核病和潜伏性结核感染。

T-SPOT.TB 的斑点数虽然并不精确地与结核活动程度成正相关，但仍然存在着结核活动程度越高斑点数越多的趋势，可以给临床医生以参考。

与外周血检测相比，浆膜腔积液 T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎更有价值。但目前没有统一的正常界值，协和医院的研究结果是：AB 之和大于 56 SFCs/10^6 PBMC，浆膜腔积液与血 T-SPOT.TB 斑点数之比大于 1 时，提示结核性浆膜炎可能。

参考资料：

uptodate：Interferon-gamma release assays for diagnosis of latent tuberculosisinfection

作者：见习超人

审阅：北京协和医院感染内科 刘晓清教授、张丽帆老师

编辑：小二仙草